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各位读者好，今天为大家带来一篇综合运用活性成分鉴定-网络药理学-分子动力学模拟的模式结合大鼠LFH模型来研究黄韧带肥厚（LFH）所致腰椎管狭窄症（LSS）靶向治疗与潜在机制的高分文章，是由佛山市中医院、广东省第二中医院等团队2026年9月在Phytomedicine发表的，题为“Tongluo Huoxue formula reduces ligamentum flavum fibrosis in lumbar spinal stenosis”。深入探究了通络活血方（TLHXF）治疗黄韧带肥厚所致腰椎管狭窄症的核心机制，为腰椎管狭窄症提供了全新靶点与候选药物，也对多靶点治疗提供了实验依据。
发表杂志：
《Phytomedicine》创刊于1994 年，旨在聚焦并推动该领域的相关研究，同时为植物药的药理研究、临床药效验证与安全性评价建立国际公认的科学标准。
2026 年影响因子：11.3
ISSN：0944-7113
中科院分区：大类1区医学，小类1区植物科学1区药物化学1区全科医学与补充医学1区药学TOP 期刊
发文量：每年出版文章数平均约468篇
发表成本：标准APC为3630–3650 美元（不含税费）
审稿周期：整体中等偏快，一审大多2–3个月，审稿意见偏向严谨，注重实验重复性与机制逻辑闭环。
《Phytomedicine》是植物药与天然药物领域经典TOP期刊，属于药学大类下的1区TOP刊物，2026最新影响因子达11.3，自引率良好，在全球天然产物药理评价体系中认可度持续走高。期刊收稿聚焦特定植物提取物、植物药及其单体活性成分，覆盖药效评价、安全性考察、质量标准控制与作用机制解析，接收临床、药理、药代及毒理学方向原创成果。国内学者发表占比逐年提升，审稿规范严谨且流程透明，无苛刻的投稿壁垒，适合植物药活性验证、机制挖掘，追求高质量成果国际曝光的科研团队投递。
研究背景：
腰椎管狭窄症是中老年高发的退行性脊柱疾病，全球患者超1亿，黄韧带肥厚是其核心病理基础，以纤维化、胶原过度沉积为主要特征。目前临床治疗以对症缓解为主，缺乏针对纤维化病理进程的有效干预手段。TGF-β/Smad通路是调控组织纤维化的关键通路，其过度激活与黄韧带肥厚的发生发展密切相关。通络活血方作为传统中药复方，长期用于退行性脊柱疾病治疗，但分子机制尚不明确。基于此，本研究拟验证TLHXF通过调控TGF-β/Smad通路抗黄韧带纤维化的作用，为其临床应用提供科学依据。
本研究聚焦黄韧带肥厚（LFH）所致腰椎管狭窄症（LSS），以通络活血方（TLHXF）为研究对象，通过UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴定其活性成分，结合网络药理学与分子 docking 预测作用靶点，进一步在大鼠LFH模型中验证疗效。研究发现TLHXF可通过抑制TGF-β/Smad信号通路，减少黄韧带胶原沉积、降低纤维化相关蛋白及促炎因子表达，最终减轻黄韧带厚度，为LSS的多靶点治疗提供了实验依据。
研究框架：
1.提出问题：
通络活血方能否通过调控TGF-β/Smad信号通路改善黄韧带肥厚，进而缓解腰椎管狭窄症？
2. 研究框架：
采用“成分鉴定-靶点预测-体内验证”的递进式研究框架，从复方物质基础、作用靶点预测到动物实验逐层验证。
3. 研究方法:
运用UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴定活性成分，网络药理学与分子对接预测靶点及通路，通过大鼠LFH模型结合MRI、组织病理、WB、PCR、IHC、ELISA等技术开展体内验证。
4. 分析数据：
采用Venn图筛选交集靶点，Cytoscape构建调控网络，DAVID进行通路富集；实验数据采用单因素方差分析与t检验比较组间差异。
5. 研究结论：
先通过计算生物学预测TLHXF作用于TGF-β/Smad通路的可能性，再通过动物实验从表型、病理、分子多层面验证通路抑制与抗纤维化、抗炎效应的关联，最终推导作用机制。
机制示意图
结果解析：
1. 通络活血方的化学成分鉴定
采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析TLHXF的化学组成，共鉴定出70种化合物；基于峰面积、化学代表性及已报道的生物活性，筛选出姜黄素、去甲氧基姜黄等5种核心活性成分并明确其化学结构。
2. 通络活血方抗黄韧带肥厚的网络药理学分析
通过疾病数据库与化合物靶点数据库的交集分析，筛选出44个共同靶点；构建蛋白-蛋白互作网络并拓扑分析得到TGF-β、Smad2/3/4、IL-1等核心枢纽靶点；KEGG富集分析显示TGF-β、PI3K-Akt、MAPK等纤维化与炎症相关通路显著富集，提示TLHXF多靶点调控LFH的作用特征。
3. 核心成分与TGF-β/Smad通路的分子对接验证
分子对接评估TLHXF中5种核心活性成分与TGF-β/Smad通路关键蛋白的结合能力，结果显示所有核心成分与靶蛋白的结合能均低于-6 kcal/mol，具有强结合亲和力，提示活性成分可通过直接结合关键蛋白调控该通路的纤维化与炎症效应。
4. MRI评估通络活血方对黄韧带厚度的改善作用
3.0T MRI检测L5-L6节段黄韧带厚度，结果显示模型组大鼠黄韧带显著增厚；高剂量与阳性药Galunisertib均可显著降低黄韧带厚度，且高剂量的抑制效果更优，证实TLHXF可在体内缓解黄韧带肥厚的病理改变。
5. Masson染色验证抗纤维化效应
Masson染色观察黄韧带组织的胶原沉积情况，结果显示高剂量与Galunisertib均可显著减少胶原纤维沉积、降低胶原体积分数，同时缩小黄韧带厚度；其中高剂量的抗纤维化作用强于阳性药，证实TLHXF可抑制黄韧带胶原过度沉积、缓解纤维化进程。
6. Western blot验证TGF-β/Smad通路及炎症因子的调控
蛋白免疫印迹技术检测黄韧带组织中关键蛋白的表达，结果显示中、高剂量可显著下调TGF-β/Smad通路核心蛋白，以及I型胶原、iNOS等纤维化与炎症相关蛋白的表达；阳性药Galunisertib仅调控TGF-β/Smad通路相关蛋白，对炎症因子无显著影响，明确TLHXF兼具通路抑制与炎症调控的双效作用。
7. 免疫组化验证通路与炎症蛋白的表达定位
免疫组化染色显示黄韧带组织中TGF-β1、Smad2/3/4等蛋白的定位与水平，结果显示模型组上述蛋白阳性表达显著升高，中、高剂量可明显降低其阳性强度，从组织定位层面进一步验证TLHXF对TGF-β/Smad通路及炎症反应的抑制作用。
8. 多维度验证抗纤维化与抗炎效应
整合免疫组化定量分析、RT-qPCR检测与血清ELISA结果，从三个层面证实：TLHXF可剂量依赖性下调TGF-β/Smad通路、纤维化标志物及炎症因子的表达，同时降低血清中TGF-β、TNF-α、IL-1β水平；而Galunisertib仅调控纤维化相关指标，对炎症因子无显著作用，验证TLHXF多靶点抗黄韧带纤维化的作用机制。
研究结论：
通络活血方能够抑制TGF-β/Smad信号通路，同时减轻黄韧带纤维化与炎症反应，降低黄韧带厚度，从而延缓腰椎管狭窄症的病理进展。其多成分、多靶点的作用特点，相较于单一通路抑制剂具有更全面的调控效应，是治疗黄韧带肥厚型腰椎管狭窄症的潜在候选药物。
研究的创新性：
首次阐明通络活血方治疗黄韧带肥厚的物质基础与分子机制，将传统中药经验与现代药理学结合；验证了中药复方多靶点调控纤维化与炎症的优势，为腰椎管狭窄症的治疗提供了新的干预思路。
研究的不足之处：
仅聚焦TGF-β/Smad通路，未深入探讨网络药理学预测的其他通路；阳性对照仅选用Galunisertib，缺乏与临床常规治疗药物的对比；研究仅在大鼠模型中开展，未进行细胞水平机制验证与临床转化研究。
研究展望：
进一步验证其他富集通路在TLHXF抗黄韧带纤维化中的作用，完善多通路调控机制；补充细胞实验，明确核心活性成分对黄韧带成纤维细胞增殖、胶原合成的直接作用；设计临床随机对照试验，验证TLHXF在腰椎管狭窄症患者中的临床疗效，推动成果转化；探索TLHXF在其他纤维化相关疾病中的应用潜力。
研究意义：
丰富了黄韧带肥厚的分子调控机制研究，为中药复方治疗退行性脊柱疾病提供了标准化的研究范式；为腰椎管狭窄症提供了兼具抗纤维化与抗炎作用的潜在治疗方案，弥补了当前对症治疗的不足，为通络活血方的临床推广应用提供了科学依据。
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