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研究背景
哮喘是一种以气道慢性炎症、高反应性和黏液过度分泌为特征的异质性疾病，全球患者已逾3亿。传统观点认为Th2细胞及其2型细胞因子是主要驱动因素，但越来越多的临床与动物证据提示，肺组织内固有免疫群体—2型固有淋巴样细胞（ILC2）可在无适应性免疫的情况下快速分泌IL-5、IL-13，放大嗜酸性粒细胞浸润与杯状细胞化生，成为哮喘发作的“点火器”。与此同时，肺内占比最高的免疫细胞M2型巨噬细胞在过敏原刺激下显著增多，其分泌的胞外囊泡（M2EV）已被证实可携带活性分子进行跨细胞调控，但M2EV是否、以及如何调控ILC2功能仍属空白。厘清这一固有免疫内部对话机制，有望发现不依赖T/B细胞的新治疗靶点。
研究结果
1. M2EV的分离与鉴定
差速超速离心结合TEM、NTA和WB证实，OVA哮喘小鼠肺组织富含直径≈115nm、经典EV标志阳性而内质网蛋白阴性的囊泡；流式及qPCR进一步显示这些EV高表达M2巨噬特征分子CD206与Arg-1，说明其主要来源于M2巨噬细胞。
2. GW4869抑制实验
nSMase2抑制剂GW4869显著减少肺EV生成，同步降低ILC2数量、Ki67增殖指数及胞内IL-5/IL-13水平，BALF中2型细胞因子和嗜酸性粒细胞浸润亦明显缓解，且保护效应在Rag1-/-小鼠一致，表明M2EV对ILC2的激活独立于T/B细胞。
3. 巨噬细胞清除与M2EV回输
氯膦酸脂质（CL）体清除肺巨噬后，ILC2比例及功能下降；随后气道回输纯化M2EV可完全恢复ILC2数量、IL-5/IL-13分泌并重新加重肺组织炎症和黏液生成，证明M2EV是维持ILC2功能的关键介质。
4. ILC2摄取M2EV的机制
PKH26标记M2EV经气道给药后，共聚焦和流式显示肺ILC2内吞荧光囊泡；体外抑制实验揭示该过程依赖dynamin介导的网格蛋白内吞、小窝/脂筏内吞及大分子胞饮多条途径。
5. M2EV对巨噬细胞和CD4+T细胞的间接作用
M2EV被21.5%肺巨噬细胞和9%CD4+T细胞摄取；回输M2EV显著增加肺内M2巨噬和Th2比例，伴随ILC2功能增强，体外共培养亦证实M2EV促进巨噬向M2极化并增强Th2表型，提示其通过第三方细胞间接放大ILC2反应。
6. lncRNA4930474H06Rik的筛选与验证
RNA-seq鉴定762个在M0-EV与M2-EV差异表达的lncRNA；综合表达丰度、物种保守性及邻近哮喘相关基因DACT1，锁定核内高表达的antisense lncRNA 4930474H06Rik，其在M2EV及哮喘肺组织中均显著富集。
7. 体外抑制4930474H06Rik的功能分析
用smart silencer敲低巨噬细胞4930474H06Rik后，所获M2EV诱导ILC2增殖、IL-5/IL-13分泌及GATA3蛋白表达的能力明显下降；同时ILC2糖酵解酶表达和ECAR升高，表明该lncRNA通过抑制糖酵解维持ILC2的2型功能。
8. 体内干预4930474H06Rik的抗炎效应
哮喘小鼠接受“4930474H06Rik低表达”M2EV后，支气管周围炎症、杯状细胞增生、BALF IL-13水平及肺嗜酸性粒细胞计数均显著降低，肺M2巨噬减少而M1增多，证实靶向该lncRNA可阻断M2EV-ILC2轴并缓解过敏性气道炎症。
研究结论
本研究首次阐明肺M2巨噬细胞通过胞外囊泡直接并间接激活ILC2驱动过敏性气道炎症，且证实囊泡内lncRNA4930474H06Rik是这一跨细胞对话的关键活性分子。抑制4930474H06Rik可削弱ILC2功能、降低2型细胞因子分泌并显著缓解哮喘样病变，为以“固有免疫-囊泡-lncRNA”为靶点的哮喘精准干预提供了新思路与实验依据。
LvK,ZhangY,YinG,LiX,ZhongM,ZhuX,PeiW.ExtracellularvesiclesderivedfromlungM2macrophagesenhancegroup2innatelymphoidcellsfunctioninallergicairwayinflammation.ExpMolMed.2025Jun;57(6):1202-1215.doi:10.1038/s12276-025-01465-6.Epub2025Jun2.PMID:40451928;PMCID:PMC12229531.
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