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细胞侵袭实验的具体操作步骤

发布时间:2021-07-22 14:20:41       点击次数:425

    细胞侵袭实验目的:研究趋化因子或其他营养物质对细胞侵袭的影响。

一、准备实验以及包被

  从冰箱中取出Assembling tool 以及 CIM plate 上板。拆开上板,可见板上和盖子上均有蓝点标记,把板放在 Assembling tool 上。

  1、首先进行 Matrigel 包被,每孔内加入 50 µl matrigel ,每做完一个梯度,即 4 个孔后, 马上从孔内轻轻吸出 30µl Matrigel。

  2、空白对照的四个孔同样加入 50µl 的无血清培养基,然后吸出 30µl。

  3、盖上盖子,将整个 Assambling tool 连同板子 ,放入培养箱中孵育 4-5 小时,使 Matrigel凝结。

二、组装 RTCA CIM Plate-16 以及测量 CI 背景值

  1、取出CIM plate 下板,放在 Assambling tool 第二个槽内,下板中加入160µl 预温好的完全培养基。将 CIM-Plate 16 Assembly Tool 旋转 90 度,将上板拿起,水平移到下板上方,检查安装是否紧扣在一起。

  2、在上板中每孔加入 30 µl 无血清培养基,盖上上板盖子将整块 CIM-Plate 16 放入 RTCA DP 分析仪。放在培养箱中平衡一个小时。

  3、一小时后,进入 schedule 页面,点击开始按钮。背景值测完后,显示 ready for starting next step.回到Message 页面,看是否有任何报错信息。

三、准备细胞,并加入 RTCA CIM Plate-16 上腔

  1、取出CIM plate,重新放回到超净台中的 Assambling tool 上,每孔加入 100 微升含 20000 个细胞的细胞悬液。

  2、为了避免培养箱内由于温差产生蒸腾作用而引起边缘效应,将 CIM 培养板,在常温下静置半个小时。
四、运行实验

  将 CIM plate 重新放回RTCA DP 分析仪上,看到提示 plate scanned, connection is OK 后,点击开始第二步。这时机器开始每 15 分钟检测一次孔内细胞的迁移的情况。

五、实验结果分析

  在 Cell Plot 页面,选择显示平均值以及标准差,点击 add ,可见不同组得到的实验信号。当 Matrigel 浓度较大时,细胞侵袭越困难,而无血清培养基对照孔内,细胞侵袭的信号就非常明显。根据包被 Matrigel 的浓度由高到低,细胞侵袭能力逐渐增强。

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