细胞侵袭实验的具体操作步骤

    细胞侵袭实验目的：研究趋化因子或其他营养物质对细胞侵袭的影响。

一、准备实验以及包被

　　从冰箱中取出Assembling tool 以及 CIM plate 上板。拆开上板，可见板上和盖子上均有蓝点标记，把板放在 Assembling tool 上。

　　1、首先进行 Matrigel 包被，每孔内加入 50 µl matrigel ，每做完一个梯度，即 4 个孔后， 马上从孔内轻轻吸出 30µl Matrigel。

　　2、空白对照的四个孔同样加入 50µl 的无血清培养基，然后吸出 30µl。

　　3、盖上盖子，将整个 Assambling tool 连同板子 ，放入培养箱中孵育 4-5 小时，使 Matrigel凝结。

二、组装 RTCA CIM Plate-16 以及测量 CI 背景值

　　1、取出CIM plate 下板，放在 Assambling tool 第二个槽内，下板中加入160µl 预温好的完全培养基。将 CIM-Plate 16 Assembly Tool 旋转 90 度，将上板拿起，水平移到下板上方，检查安装是否紧扣在一起。

　　2、在上板中每孔加入 30 µl 无血清培养基，盖上上板盖子将整块 CIM-Plate 16 放入 RTCA DP 分析仪。放在培养箱中平衡一个小时。

　　3、一小时后，进入 schedule 页面，点击开始按钮。背景值测完后，显示 ready for starting next step.回到Message 页面，看是否有任何报错信息。

三、准备细胞，并加入 RTCA CIM Plate-16 上腔

　　1、取出CIM plate，重新放回到超净台中的 Assambling tool 上，每孔加入 100 微升含 20000 个细胞的细胞悬液。

　　2、为了避免培养箱内由于温差产生蒸腾作用而引起边缘效应，将 CIM 培养板，在常温下静置半个小时。
四、运行实验

　　将 CIM plate 重新放回RTCA DP 分析仪上，看到提示 plate scanned, connection is OK 后，点击开始第二步。这时机器开始每 15 分钟检测一次孔内细胞的迁移的情况。

五、实验结果分析

　　在 Cell Plot 页面，选择显示平均值以及标准差，点击 add ,可见不同组得到的实验信号。当 Matrigel 浓度较大时，细胞侵袭越困难，而无血清培养基对照孔内，细胞侵袭的信号就非常明显。根据包被 Matrigel 的浓度由高到低，细胞侵袭能力逐渐增强。