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透射电镜实验技术简要介绍

发布时间:2021-10-21 18:28:37       点击次数:267

  透射电镜实验技术简要介绍
  样本制备方法:
  由于电镜电子束穿透能力的限制,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。
  在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
  一取材的基本要求
  组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:
  (1).动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内(争取在1分钟内)投入2.5%戊二醛固定液。
  (2).所取组织的体积要小,一般不超过1mm×1mm×1mm。也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形。因为固定剂的渗透能力较弱,组织块如果太大,块的内部将不能得到良好的固定。
  (3).机械损伤要小,解剖器械应锋利,操作宜轻,避免牵拉、挫伤与挤压。
  (4).操作最好在低温(0℃~4℃)下进行,以降低酶的活性,防止细胞自溶。
  (5).取材部位要准确。
  取材方法:将取出的组织放在洁净的蜡版上,滴一滴预冷的固定液,用两片新的、锋利的刀片成“拉锯式”将组织切下并修小,然后用牙签或镊子将组织块移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果组织带有较多的血液和组织液,应先用固定液洗几遍,然后再切成小块固定。

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