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原代分离是指从活体组织(如动物器官、组织或人体活检样本等)中，通过特定的方法将细胞从其原有的组织结构中释放出来，并去除杂质和非目标细胞，从而获得较为纯净的单一细胞群体或混合细胞群体的过程。这些分离得到的细胞被称为原代细胞，它们保留了来源组织细胞的许多生物学特性和功能，更接近体内细胞的真实状态。
研究细胞真实生理功能：与传代多次的细胞系相比，原代细胞更能准确反映体内细胞的生理状态和功能。通过原代分离获得的细胞，可以用于研究细胞在正常生理条件下的代谢、增殖、分化、信号传导等过程，为深入理解细胞的生物学行为提供可靠依据。
药物筛选与毒性评价：原代细胞具有较高的生物相关性，在药物筛选和毒性评价方面具有特殊优势。使用原代细胞进行药物测试，可以更准确地预测药物在体内的疗效和安全性，减少动物实验的使用，降低研发成本和周期。
原代分离的常用方法：
(一)酶消化法
原理：利用酶的特异性降解作用，破坏细胞间质和细胞外基质中的蛋白质、多糖等成分，使细胞从组织中分离出来。常用的酶包括胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶等，不同类型的组织需要选择合适的酶组合和消化条件。
操作步骤：首先将组织切成小块，用无钙镁离子的缓冲液清洗去除血液和杂质;然后将组织块置于含有适量酶的消化液中，在适宜的温度(通常为37℃)和振荡条件下进行消化;消化过程中需密切观察组织块的消化情况，当组织块变得松散、细胞开始分散时，立即加入含有血清的培养液终止消化;通过离心、过滤等方法收集细胞悬液，去除未消化的组织碎片和酶液。
(二)机械分散法
原理：通过物理手段(如剪切、研磨、挤压等)破坏组织结构，使细胞分散开来。这种方法适用于一些质地较软、细胞间连接相对疏松的组织，如脑组织、脂肪组织等。
操作步骤：将组织块放在平皿中，用眼科剪或手术刀将其剪碎成较小的颗粒;然后将剪碎的组织转移至注射器内，用适当的针头反复抽吸，使组织进一步分散;也可以使用研钵和杵子对组织进行研磨，但要注意控制力度，避免过度损伤细胞;最后将分散后的组织悬液通过筛网过滤，去除较大的组织块，得到细胞悬液。
(三)组织块培养法
原理：将组织块直接接种到培养容器中，让组织块中的细胞自然迁移出来并在培养基中生长繁殖。这种方法适用于一些具有较强迁移能力的细胞，如成纤维细胞、上皮细胞等。
操作步骤：将组织块用无菌生理盐水或培养液清洗干净后，用眼科剪将其剪成约1mm的小块;用镊子将组织块均匀地接种到培养瓶或培养皿的底部，组织块之间保持适当的距离;轻轻翻转培养容器，使培养液覆盖组织块，但不要让组织块浸没在培养液中，以利于细胞从组织块中迁移出来;将培养容器置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，定期观察细胞生长情况，待细胞生长形成单层后进行传代培养。
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