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冰冻切片

简要描述:冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。其制作过程较石蜡切片快捷、简便,多应用于手术中的快速病理诊断。取下的新鲜组织应立即放入超低温冰箱或者液氮中,用干冰运输;

  • 更新时间:2021-07-09 16:39:22
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详细介绍

1.取材:
应尽可能快地采取新鲜的材料,防止组织发生死后变化。
2.速冻:
为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要,一般在取材后就要立刻对组织块进行速冻,使组织温度骤降,缩短降温的时间,减少冰晶的形成。液氮速冻切片法是实验室最常用的速冻切片方法。具体做法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内(直径约2cm),如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织,然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾,此时小盒保持原位切勿浸入液氮中,大约10-20s 组织即迅速冰结成块。在制成冻块后,即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。若需要保存,应快速以铝箔或塑料薄膜封包,立即置入-80°C冰箱贮存备用。

3.固定:
样品托上涂一层OCT包埋胶,将速冻组织置于其上,4"C冰箱预冷5-10min让0CT胶浸透组织。

取下组织置于锡箔或者玻片上,样品托速冻。
组织置于样品托上,其上再添一层OCT胶,以完全覆盖为宜,速
冻架(PE)上30min。
4.切片:
恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机,其基本结构是将切片机置于低温密闭室内,故切片时不受外界温度和环境影响,可连续切薄片至5-10ym。 切片时,低温室内温度以-15°C~-20°C为宜,温度过低组织易破碎,抗卷板的位置及角度要适当,载玻片附贴组织切片,切勿上下移动。切好室温放置30min后,入4C丙酮固定5- 10min,烘箱干燥20min。PBS 洗5minX3。进行抗原热修复,微波热修复也可,室温自然冷却。可用3%H202 孵育5~10min,消除内源性过氧化物酶的活性。
 

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