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大鼠髓核细胞的原代培养

更新时间:2023-09-11 17:10:10       点击次数:881

1. 颈椎脱臼法处死SD大鼠。

2. 剃去背毛,75%酒精浸泡5min

3. 从尾椎处剪开皮肤,取出腰椎。

4. 尽量剔除附着的肌肉,用含2%双抗的PBS冲洗3-5次。

5. 分离椎节,切开纤维环分离凝胶状髓核,将凝胶状髓核置于PBS中冲洗 3 次,去除血迹,剪碎髓核组织呈 1mm3大小,移至离心管后加入5倍体积的1.5%Ⅱ型胶原酶,37℃摇床消化2h

6. 消化结束 20%FBS终止消化,100um滤网过滤,1000r/min 离心 5min,弃上清后DMEM/F12 重悬,按 1×105 /ml接种于培养板,加入含1%双抗和 15% FBS DMEM/F12置于 37 ℃细胞培养箱中培养。

7. 4 d后首次换液,以后每3天换 1 细胞达 90% 融合后传

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