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简析凋亡检测实验的目的及操作流程

发布时间:2021-07-28 16:54:32       点击次数:341

凋亡检测实验的目的:
      掌上细胞凋亡细胞的形态特征
      通过实验通过用荧光探针对细胞进行双重标记来检测正常的活细胞,凋亡细胞和坏死细胞的方法。

1、取Falcon试管,按标本顺序编好阴性对照管和标本管号。

2、使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次,再用1xBinding Buffer缓冲液制成1x106细胞/ml的悬液。试剂由优宁维生物提供。

3、Falcon试管中加入100μl 细胞悬液。

4、按以下体积加入AnnexinV与核酸染料:

5、轻轻混匀,室温(20°C ~25°C)避光处放置15分钟。


6、使用Annexin V-Biotin试剂进行检测时: 
       1xBinding Buffer缓冲液洗细胞一次,去上清。 
       1xBinding Buffer缓冲液100µl溶解SAv-FITC试剂0.5µg,加入到细胞管中。 
       轻轻混匀。加入5µl PI,室温(20-25°C)避光处放置15分钟。 

7、各试验管中分别加入1xBinding Buffer缓冲液400µl。1小时内上流式细胞仪测定结果。

注意事项:

1、诱导培养 HL-60 细胞时间要准确;
2、荧光显微镜下观察细胞时,由于荧光易碎灭,观察时要尽量快。
 

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