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浅析分子克隆的原理及操作步骤

发布时间:2021-08-02 16:26:15       点击次数:312

        克隆(clone,clon)一词源于希腊文Klon,原意为树木的枝条。在生物学中其名词含义系指一个细胞或个体以无性繁殖的方式产生一群细胞或一群个体,在不发生突变的情况下,具有完全相同的遗传性状,常称无性繁殖(细胞)系;其动词(clone,cloned,cloning)含义指在生物体外用重组技术将特定基因插入载体分子中,即分子克隆技术。研究基因的第一步是分离它并获得许多与它完全相同的拷贝。这称为“克隆”基因。一个基因被克隆的过程称为分子克隆
       分子克隆是指分离一个已知DNA序列,并以in vivo(活体内)方式获得许多复制品的过程。这一复制过程经常被用于增加并获取DNA片段中的基因,但也可用来增加某些任意的DNA序列,如启动子、非编码序列、化学合成的寡核苷酸或是随机的DNA片断。
PCR技术:使DNA分子先解螺旋,然后以得到的单恋为模版进行复制。

步骤:
  1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下, 氢键断裂,形成单链DNA
  2.退火(25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
  3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性较好)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链。
  每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。 

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