尼氏染色的具体操作步骤及注意事项

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　　尼氏体(Nisslbody)或称尼氏小体，分布于神经细胞胞质内的三角形或椭圆形小块状物质。尼氏染色（FrannaNissl(1860-1919)）1892年创立了Nissl染色法，以发现Nissl小体和Nissl变性而闻名。常用的碱性染料有Cresylviolet(焦油紫，甲酚紫，克紫）；thionine(硫荲)；tolridineblue(甲苯胺蓝)等。
　　尼氏染色原理
　　神经元细胞体包括一个具有皱褶核膜的大细胞核、稀疏的染色质和一个明显的核仁。在细胞体中细胞质是尼氏颗粒，即能够代表粗面内质网并在很多神经元中产生特异的斑点状嗜碱性表现的嗜碱性颗粒。尼氏颗粒可以用很多染色来显示如中性红、亚甲基蓝、甲苯胺蓝和甲基紫等。染色的变异、pH和分化的时间使一些染色既可以仅突出尼氏物质，也可以显示神经元的细胞核和神经胶质。各种神经细胞内都含有尼氏体，但其形状、数量、分布位置常常不同。尼氏体也存在于树突中，但不在于轴突和包体的轴丘。尼氏体会因为生理状态的变化而变化，尼氏体是神经元内合成蛋白质合成的重要部位，当神经元受到刺激后，包体内的尼氏体会明显减少。通常尼氏能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。
　　尼氏染色操作步骤(仅供参考)：
　　1.固定：可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福尔马林溶液。
　　2.组织切片
　　3.切片脱蜡入水。
　　4.用甲基紫染色液涂片，染色10~20min。
　　5.蒸馏水冲洗。
　　6.用NisslDifferentiation分化4~8s，直到大部分染色被消除。
　　7.直接经无水乙醇至二甲苯，显微镜下观察。
　　8.如果有必要，重复步骤6和7。重复时，给予少量NissolDifferentiation分化。
　　9.在二甲苯中充分冲洗。加拿大香脂或DPX封片。
　　尼氏染色结果：
　　尼氏物质或尼氏小体紫黑蓝色；
　　神经元;淡紫蓝色；
　　细胞核紫蓝色；
　　尼氏染色注意事项：
　　1.尼氏体离体后容易溶解，所以组织取出后应立即固定，否则难以着色。
　　2.组织固定起着非常重要的作用，固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福尔马林溶液。
　　3.本染色液对石蜡组织切片的尼氏染色效果较好。
　　4.如果要证实尼氏物质的存在，那么染色后必须要用NissolDifferentiation分化。
　　5.石蜡切片厚度7～10μm或25μm(皮质神经元密度的评估要用25μm厚的切片)。
　　6.染色后的标本务必避光保存，否则容易褪色。
　　7.主要由甲基紫染色液、分化液等组成。尼氏物质呈紫黑蓝色,神经元呈淡紫蓝色,细胞核呈紫蓝色。
　　以上就是尼氏染色的相关介绍，你了解了吗？