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细胞免疫荧光的具体实验步骤介绍

发布时间:2022-02-11 13:18:51       点击次数:613

  细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导,细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合,原理就是利用抗原-抗体反应之后,采用荧光标记,标记完成后,显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少,从而做出一个定位研究,也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导,细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速度快的特点,是目前比较常用的组织学技术,也是比较精确的。
  细胞免疫荧光实验步骤:
  首日:
  1.在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;
  2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次3min;
  3.0.5%TritonX-100(PBS配制)室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);
  4.PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min;
  5.吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜;
  次日:
  6.加荧光二抗:PBST浸洗爬片3次,每次3min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min;注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
  7.复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST5minx4次洗去多余的DAPI;8.用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察采集图像。

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