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Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿关节炎模型

发布时间:2022-12-20 15:06:41      点击次数:214

动物雄性DBA1/J 小鼠 (6–8 )

型胶原:

型胶原(type collagen, C)以冻干粉形式购买,将其溶解在乙酸(10mM)中,通过温和搅拌数小时至过夜获得所需浓度(2-4 mg /ml)。当胶原蛋白溶解后,将其分为等份,冷冻-70。试剂和玻璃器皿应预先4冷却避免使C变性,注意搅拌板处于开启状态,在寒冷的房间里也不会产生热量。

乳化液的制备:

1.计算制备乳化液所需的胶原蛋白和完全弗氏佐剂(Complete Freund adjuvant, CFA)的体积,比例为1:1,每只小鼠需要50μl乳化液。

注意事项:使用组织匀浆器进行乳化,乳化过程中,尽可能将所有试剂放在冰上。保持试剂低温可防止C变性,这对于在小鼠模型中诱发高发病率至关重要。

2. 将胶原蛋白一滴一滴地添加到CFA中,同时以中速混合乳化液,保持在低温下操作。

3. 从匀浆器中取出乳化液,确保乳化液完全混合,外观和粘度与搅打奶油相同。如果乳化程度不令人满意,则进一步用匀浆器混合以提高乳化液质量。

4. 将乳化液转移到1毫升注射器中进行免疫接种。

建模:

    麻醉小鼠,选择距尾基部约1.5cm的注射部位,慢慢地将50μl乳化液皮内注射(i.d.)至尾部。二次免疫有时在接种后1421天,以确保高发病率,所用的C浓度与初次免疫的相同;但是,C不完全弗氏佐剂Incomplete Freund adjuvant, IFA)中乳化用于此免疫。注射部位同样位于尾部,靠近初次注射部位。

模型评估:

每周对小鼠进行两到三次关节炎发病率评估。每个爪子应在0-4分的范围内进行评估和单独评分,4表示最严重的炎症。

0分:没有红斑和肿胀的迹象。

1分:局限于跗骨或踝关节的红斑和轻度肿胀。

2分:从脚踝到跗骨的红斑和轻度肿胀。

3分:从脚踝到跖骨关节的红斑和中度肿胀。

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