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结核病的分子实验检测技术有哪些?

发布时间:2021-11-01 15:00:16      点击次数:175

  结核病的分子实验检测技术有哪些?
  结核病是一种病因明确、治有办法的疾病。它一年四季均可发病,15~35岁的人群是该病的高发人群,其潜伏期为4~8周,其中80%发生在肺部,其他部位也可继发感染。
  该病主要经呼吸道传播,传染源是接触排菌的肺结核患者。抗结核药物具有杀菌、灭菌或抑菌作用,通过化疗直接进行抗菌治疗效果显著。
  但是,结核病的诊断较为困难。现在,我们可以利用多种实验室诊断技术来诊断结核病,提高结核病诊断的特异性和敏感性。
  其中,分子生物学检测技术是近年来广泛应用的一种技术。目前,多种分子生物学检测方法正在研发和评估之中,其敏感性较高,诊断快速,越来越受到广大临床医生的青睐。
  分子实验检测的聚合酶链反应技术
  聚合酶链反应(PCR)技术可以将标本中微量的结核杆菌DNA(脱氧核糖核酸)加以扩增。一般情况下,显微镜检查仅能检测到104~105条菌/毫升,而PCR技术可检测出1~100飞克的结核杆菌的DNA,相当于1~20条菌/毫升。
  但是,在DNA提取过程中容易遭遇到污染等技术原因,从而导致检验结果出现假阳性。此外,PCR技术无法区分死菌和活菌。
  因此,PCR技术不能作为结核杆菌治疗效果的评估依据,以及用于流行病学调查等。
  目前,我们在采用PCR技术的同时,可以对结核杆菌耐药相关基因(如与利福平耐药相关的rpoB基因、与异烟肼耐药相关的katG基因等)进行检测。
  分子药物敏感试验,也是应用PCR技术进行检测的,这是对耐药位点突变的一种检测方法。它包括直接测序、高分辨率溶解曲线分析、线性探针杂交、基因芯片检测技术,以及新近在国际上广泛应用的半巢式实时多聚酶链式反应技术等。
  其中,全自动封闭操作的半巢式实时多聚酶链式反应技术检测方便,除了可以鉴定结核杆菌之外,还能检测利福平耐药的分子标记,被世界卫生组织推荐应用于临床治疗前的快速分子药物敏感性检测与菌种的鉴定。
  线性探针杂交方法与基因芯片检测技术比较烦琐,但是能对一线和二线的抗结核药物敏感性进行快速检测,并且能够应用在非结核杆菌的菌种鉴定上面。
  半巢式实时多聚酶链式反应技术
  全自动封闭操作的半巢式实时多聚酶链式反应(XpertMTB/RIF)技术是一种自动化的、以实时定量PCR扩增为基础的方法,以rpoB基因为靶基因,检测标本中是否含有结核杆菌以及利福平是否耐药。整个检测过程大约需要2小时,并且具有良好的生物安全性和操作简便性。

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