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裸鼠成瘤实验技巧有哪些?

发布时间:2021-11-04 11:20:50      点击次数:170

裸鼠成瘤实验实验室常用的是BALB/c-nu裸小鼠 ,随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸鼠体内正常T细胞会增加,故接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠。


裸鼠成瘤实验技巧
1、细胞的状态是成瘤实验的关键,所以细胞生长状态一定要好,取处于对数生长期的细胞,细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍,目的为去除细胞中残余的血清。
3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度,一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支,接种体积为0.1-0.2ml,因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml,如若有条件的实验室,也可以加基质胶以加速瘤块的生成,基质胶与PBS或无血清的比列为1:1。

4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下,一般尽量在半小时内完成(如果接种量大,可以分批接种),途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。
5、选择的裸鼠一般在4-6周龄,体重16-18g左右,种植部位选择血供丰富区域,如腋窝中后部。

6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散,防止细胞成团而降低细胞成活率,并且导致小鼠接种细胞数量的差异过大。

7、接种时,针头在皮下进针深一点,约1cm深,针头在皮下左右滑动几次,以便细胞接种成团,减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

8、如何保定裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤,小拇指夹住裸鼠尾巴。

9、接种后1-2周左右可以见到皮下开始出现肿块。

10、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量,一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大,一般不要超过2000mm3。

11、肿瘤大小测量一般为1周两次,游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2*a*b2 (a为长轴,b为短轴)。

12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA,一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。

 

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