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原代神经干细胞

简要描述:

  • 更新时间:2024-02-21 00:00:00
  • 访  问  量:1096

详细介绍

胚胎大鼠脑神经干细胞的分离和培养

1. 牺牲胎龄14-16天的SD大鼠,刮除腹部手术区域的毛发,75%乙醇全身浸泡消毒。

2. 解剖孕鼠,取出子宫并冲洗。

3. 取出胚胎,置于含有冰冷的HBSS液平皿中。

4. 手术显微镜下剥离出大脑半球,小心地剥去脑膜和血管。

5. 剥去脑膜和血管的大脑皮质,用冰冷的HBSS液清洗三次。

6. 将大脑皮质剪成1mm3的小块,用1ml枪头轻轻吹打后,使之成为细胞悬液,并通过70um的筛网过滤。

7. 将收集到的细胞悬液离心后,用神经干细胞基础培养液重悬,然后离心,弃掉上清液。

8. 经计数和活力观察,将细胞密度调至1×106/ml,以1.5×105/ml的细胞密度种入T25培养瓶中,同时加入FGF-2EGF5%CO237℃环境中培养,直到神经干细胞分裂、增殖形成较大的神经细胞球后再作传代处理。

9. 细胞传代,将神经细胞球悬液移至离心管,经低速离心后,吸弃上清液,加入神经干细胞完全培养液,用200ul枪头吹打,使之成为单个细胞悬液,定量加入神经干细胞完全培养液后,进行细胞计数和活力观察。

10. 传代后的细胞既可用来诱导分化,也可以继续种瓶培养,还可以冷冻保存以备后用。

11. 神经干细胞的分化和鉴定。

 

 

 

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