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特点:w一能w全模拟人类HBV自然感染的模型,支持病毒完整生命周期(感染、复制、免疫应答)。
局限性:伦理限制、成本高昂,目前已极少使用。
特点:
小型灵长类动物,对HBV部分易感,可发生急性感染(病毒血症、肝损伤)。
适合研究早期感染和免疫应答。
构建方法:
通过尾静脉或肝内注射临床HBV毒株(如基因型B或C)。
检测指标:血清HBsAg/HBeAg(ELISA)、HBV DNA(qPCR)、肝组织HBcAg(免疫组化)。
缺点:感染率不稳定,难以形成慢性感染。
通过移植人肝细胞或造血干细胞,使小鼠具备HBV易感性:
常用模型:
uPA/SCID小鼠:表达尿j酶纤溶酶原激活剂(uPA),小鼠肝细胞凋亡后移植人肝细胞(如FRG小鼠)。
FRG小鼠(Fah⁻/⁻ Rag2⁻/⁻ IL2Rγ⁻/⁻):通过人肝细胞重建人肝组织。
构建步骤:
移植人原代肝细胞(或HepaRG细胞系)。
通过尾静脉注射HBV病毒颗粒(≥1×10⁷ IU/mouse)。
监测血清HBsAg、HBV DNA及肝内cccDNA(持续感染标志)。
优势:支持HBV慢性感染和药物评价(如核苷类似物)。
缺点:成本高,需专业操作(如肝细胞移植)。
原理:通过基因编辑在小鼠基因组中整合HBV全基因组或部分片段(如1.3倍HBV基因组)。
常用品系:如C57BL/6J背景的HBV1.3 Tg小鼠。
特点:
持续表达HBsAg/HBeAg,但缺乏免疫介导的肝损伤(免疫耐受)。
适用于疫苗免疫机制研究或免疫激活模型(如通过腺病毒表达HBV抗原打破耐受)。
局限性:非自然感染,病毒复制水平低。
原理:通过尾静脉快速注射HBV质粒DNA(如pAAV-HBV1.3),利用流体压力使DNA进入肝细胞。
步骤:
注射体积:8–10%小鼠体重的生理盐水(如2.5 mL/25g小鼠),5–8秒内完成。
质粒剂量:10–50 μg HBV重组质粒。
特点:
快速诱导HBV抗原表达(1周内出现HBsAg),适合急性感染研究。
无cccDNA形成,感染持续时间短(2–4周)。
鸭乙肝病毒(DHBV)模型:
使用雏鸭(1–3日龄)通过静脉接种DHBV。
适用于抗病d药物初步筛选(如恩替k韦的早期研究)。
土拨鼠肝炎病毒(WHV)模型:
土拨鼠(Marmota monax)感染WHV后可发展为慢性肝炎和肝癌,适合致癌机制研究。
研究目标 | 推荐模型 | 关键指标 |
---|---|---|
慢性HBV感染与免疫耐受 | 人源化肝脏小鼠或HBV-Tg小鼠 | cccDNA、HBsAg持续阳性、肝纤维化 |
抗病d药物评价 | 人源化小鼠/HDI模型 | HBV DNA下降、HBsAg清除率 |
疫苗免疫应答 | HBV-Tg小鼠或树鼩 | 中和抗体滴度、T细胞应答(IFN-γ ELISPOT) |
肝癌发生机制 | WHV感染土拨鼠 | 肝组织病理、肿瘤标志物(AFP) |
实验设计:
设立空白对照、病毒对照(如注射HBV阴性血清)及治疗组。
监测动物福利(如人源化小鼠易发生肝损伤)。
检测技术:
cccDNA检测:需用特异性PCR或Southern blot。
肝组织分析:H&E染色、HBcAg免疫组化、纤维化评分(Ishak评分)。
生物安全:HBV操作需在BSL-2实验室进行。
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