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TUNEL检测

简要描述:TUNEL(TdT-mediated DUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。

  • 更新时间:2021-07-06 14:53:01
  • 访  问  量:391

详细介绍

TUNEL染色操作方法:

(1)固定:将细胞爬片用0.02M PBS洗去培养基,再用4%甲醛固定30min,0.02M PBS洗3min×3次。

(2)消化:将细胞爬片浸入胰蛋白酶内消化40分钟,PBS洗3min×3次。

(3)制备TUNEL反应混合液,用50μl TdT+450μl 荧光素标记的dUTP液混匀。

(4)加50μl TUNEL反应混合液于细胞爬片上,在暗湿盒中反应37℃反应1h;PBS洗3min×3次。

(5)加50ul POD于细胞爬片上,在暗湿盒中反应37℃×30min,PBS洗3min×3次。

(6)DAB染色3-10min,自来水冲洗,苏木素复染, 1%盐酸酒精分化,显微镜下观察,控制染色程度。

(7)脱水:75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精,逐级脱水、各3min。

(8)透明:二甲苯透明3min×2次。

(9)中性树胶封片。 

(10)通过显微镜采集分析样本相关部位,计算凋亡率。

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