TUNEL检测

简要描述：TUNEL(TdT-mediated DUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。

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详细介绍

TUNEL染色操作方法：

（1）固定：将细胞爬片用0.02M PBS洗去培养基，再用4%甲醛固定30min，0.02M PBS洗3min×3次。

（2）消化：将细胞爬片浸入胰蛋白酶内消化40分钟，PBS洗3min×3次。

（3）制备TUNEL反应混合液，用50μl TdT+450μl 荧光素标记的dUTP液混匀。

（4）加50μl TUNEL反应混合液于细胞爬片上，在暗湿盒中反应37℃反应1h；PBS洗3min×3次。

（5）加50ul POD于细胞爬片上，在暗湿盒中反应37℃×30min，PBS洗3min×3次。

（6）DAB染色3-10min，自来水冲洗，苏木素复染， 1%盐酸酒精分化，显微镜下观察，控制染色程度。

（7）脱水：75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精，逐级脱水、各3min。

（8）透明：二甲苯透明3min×2次。

（9）中性树胶封片。

（10）通过显微镜采集分析样本相关部位，计算凋亡率。

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