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过表达慢病毒构建

简要描述:慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的病毒载体。对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且正在获得越来越广泛的应用。

  • 更新时间:2021-07-09 14:22:53
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详细介绍

实验流程:

利用限制性内切酶消化获得线性化载体。PCR 扩增制备目的基因片段。所用扩增引物在设计时需在其5'端添加同源重组序列(图中以绿色和蓝色标记),使用该引物扩增目的基因片段,扩增产物5'和3'最末端的序列分别与线性化克隆载体两末端序列完全一致。以线性化载体和目的基因扩增产物配制反应体系,进行重组反应,实现线性化载体和目的基因片段的体外环化。重组产物直接进行转化,挑取平板上的单克隆进行PCR鉴定,对阳性克隆进行测序及结果分析。将正确克隆菌液打大培养、抽提,获得高纯度质粒,用于后续实验。
 

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