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动物：BALB/c或C57BL/6小鼠（8-10周龄，雄性更佳）
病原体：铜绿假单胞菌PAO1或临床分离株（OD600=0.6时约1×10^8 CFU/mL）
设备：
定制铜质烫伤仪（直径1cm，重量30g）或可控温热水循环系统
红外测温仪、无菌活检穿孔器
耗材：无菌透明敷料（Tegaderm™）、苦味剂（防舔舐）
麻醉与备皮：
异fu烷麻醉，背部剃毛，脱毛膏处理残留毛发。
碘伏+75%酒精消毒皮肤3次。
标准化烫伤：
干热法：预热的铜棒（100℃）接触皮肤10秒（Ⅲ度烧伤，需病理确认全层皮肤坏死）。
热水法：90℃水浴中背部皮肤接触8-10秒（需固定小鼠体位）。
创面确认：
苍白无出血、无痛觉反应提示全层烧伤。
立即腹腔注射生理盐水1mL（预防休克）。
菌液制备：
离心收集对数期细菌，PBS调整至5×10^6 CFU/50μL。
接种方法：
用移液器将50μL菌液均匀滴加至烫伤创面。
覆盖透明敷料（模拟湿润环境，促进生物膜形成）。
术后管理：
单笼饲养，每日更换敷料，观察创面渗出/坏死。
| 参数 | 推荐范围 | 调整依据 |
|---|---|---|
| 烫伤温度 | 90-100℃ | <80℃难以形成全层烧伤，>120℃导致碳化 |
| 接触时间 | 8-12秒 | 与皮肤厚度相关（C57BL/6需更长） |
| 细菌剂量 | 1×10^6-10^7 CFU/创面 | 过高导致全身感染，过低难以定植 |
| 感染周期 | 3-7天（急性） / 14天（慢性） | 铜绿假单胞菌生物膜3天后成熟 |
| 指标 | 评分标准 |
|---|---|
| 红肿 | 0=无，1=边缘红肿，2=扩展至周围组织 |
| 化脓 | 0=无，1=少量渗出，2=大量脓性分泌物 |
| 坏死 | 0=无，1=部分焦痂发黑，2=全创面坏死 |
细菌载量：
剪取创面组织（含周围5mm正常组织）。
匀浆后梯度稀释，接种LB平板计数CFU/g组织。
组织病理：
HE染色：中性粒细胞浸润、组织坏死深度。
Gram染色：观察细菌分布。
生物膜检测：
扫描电镜或共聚焦显微镜（SYTO9/PI染色）。
体重下降（>20%需人道终点）。
血液CFU计数（判断是否发生败血症）。
烫伤均一性控制：
使用固定压力烫伤仪（如50g/cm²压力）。
同一实验员操作以减少变异性。
感染剂量验证：
预实验检测不同剂量下72h创面CFU（理想范围1×10^5-10^6 CFU/g）。
镇痛管理：
术后布tuo啡诺（1mg/kg SC q12h）减轻疼痛。
糖尿病模型适配：
db/db小鼠烫伤后感染率更高，但需延长愈合观察期。
混合感染模型：
联合接种金黄色葡tao球菌（1×10^5 CFU）和铜绿假单胞菌（1×10^6 CFU）模拟临床复杂感染。
免疫抑制处理：
环lin酰胺（150mg/kg IP）预处理增强感染易感性。
生物膜强化：
延迟抗生素治疗至接种后48h，促进生物膜形成。
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