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常用品系
BALB/c小鼠：对H1N1敏感，免疫应答强（Th2偏向），适合疫苗研究。
C57BL/6小鼠：Th1应答优势，适合免疫机制研究。
DBA/2小鼠：对部分H1N1毒株高度易感，可致重症肺炎。
年龄与体重：6-8周龄（18-20g），避免年龄差异导致的结果偏差。
饲养环境：SPF级设施，控制温湿度（22±2℃，50%湿度）。
毒株选择
实验室常用株：A/Puerto Rico/8/1934 (H1N1, PR8)、A/WSN/1933 (H1N1, WSN)。
临床分离株：需通过MDCK细胞或鸡胚传代适应小鼠。
病毒扩增与滴定
在MDCK细胞或鸡胚尿囊腔中增殖，测定TCID₅₀或PFU（空斑形成单位）。
储存：分装后-80℃保存，避免反复冻融。
麻醉：吸入异f烷（3%诱导，1.5%维持）或腹腔注射戊巴b妥钠（50mg/kg）。
接种途径：
鼻内接种（常用）：小鼠仰卧，垂直滴注病毒液（30-50μL/只，含1×10³~10⁵ PFU）。
气管内接种（需手术暴露气管）：精准递送至下呼吸道，适用于重症模型。
亚致死感染：1×10³ PFU（用于免疫研究）。
致死性感染：5×10⁴ PFU（生存率分析）。
阴性对照：PBS或未感染细胞上清。
灭活病毒对照：紫外线或β-丙内酯灭活病毒。
体重下降：每日称重，下降>20%为人道终点。
症状评分（0-5分）：
0分：无症状；1分：竖毛；2分：活动减少；3分：呼吸困难；4分：濒死状态。
肺组织病毒载量：
处死后取肺，匀浆后通过qPCR（检测NP基因）或噬斑试验（PFU/g组织）。
鼻腔冲洗液：监测上呼吸道病毒脱落。
肺组织HE染色：评估炎症（肺泡壁增厚、浸润）、出血、坏死。
免疫组化：检测病毒抗原（如NP蛋白）分布。
细胞免疫：流式检测肺内CD8⁺ T细胞、巨噬细胞（如CD11b⁺F4/80⁺）。
体液免疫：ELISA检测血清IgG/IgA（针对HA或NP蛋白）。
生物安全：
H1N1为BSL-2病原体，操作需在二级生物安全柜中进行，废弃物高压灭菌。
剂量验证：
预实验确定毒株的LD₅₀（半数致死量），避免过度感染导致快速死亡。
时间节点：
急性期：感染后3-5天（病毒复制高峰）；
恢复期：7-14天（免疫应答高峰）。
伦理终点：
体重下降>20%、严重呼吸困难或无法进食时需人道处死。
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