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青光眼动物模型构建

简要描述:青光眼动物模型构建:青光眼动物模型是研究眼压升高、视神经损伤及视网膜神经节细胞(RGC)死亡机制的核心手段

  • 更新时间:2025-07-11 09:11:30
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详细介绍

一、青光眼动物模型构建分类与选择

1. 高眼压模型(模拟原发性开角型青光眼)

模型类型适用动物造模方法优缺点
激光诱导大鼠、小鼠、兔氩激光光凝房角(需前房注射印度墨汁增强吸收)
- 参数:50-100 μm光斑,0.1-0.5 s,50-100 mW
✅ 可精确控制眼压升高幅度
❌ 需熟练操作,可能引发炎症反应
微球注射小鼠、大鼠- 前房注射聚苯乙烯微球(10 μm,5-10 μL,阻塞小梁网)
- 可联合viscoelastic凝胶延长高眼压
✅ 操作简单,眼压稳定维持2-4周
❌ 需定期监测眼压(Tonolab)
激素诱导兔(新西兰白兔)- 地s米松滴y液(0.1%,每日2次,持续4-6周)✅ 模拟糖皮质激素性青光眼
❌ 仅适用于兔,眼压升高较缓慢

2. 视神经损伤模型(模拟青光眼性视j病变)

模型类型适用动物造模方法应用场景
视神经钳夹大鼠(SD/Wistar)- 手术暴露视神经,用显微血管夹(压力50-70 g)夹持5-10秒✅ 直接模拟轴突损伤
❌ 需开颅操作,损伤不可逆
NMDA兴奋毒性小鼠、大鼠- 玻璃体内注射NMDA(20-40 nmol/μL,2 μL)诱导RGC凋亡✅ 快速诱导RGC死亡(24-72小时)
❌ 不涉及眼压升高

3. 遗传性青光眼模型

  • DBA/2J小鼠:自发突变导致虹膜萎s、房角关闭,眼压逐渐升高(6-12月龄)。

    • 特点:模拟原发性闭角型青光眼,需长期观察。

  • Myocilin突变小鼠:过表达人突变MYOC基因(如Tyr437His),诱导小梁网功能障碍。


二、青光眼动物模型构建关键实验步骤与注意事项

1. 眼压监测

  • 仪器选择

    • 小鼠/大鼠:TonoLab或Tono-Pen(需麻醉,如异f烷)。

    • 兔:Goldmann压平眼压计(局部麻醉)。

  • 测量频率:造模后每日或隔日测量,持续2-4周。

2. 视网膜神经节细胞(RGC)评估

  • 标记方法

    • 逆行标记:上丘注射荧光金(FluoroGold),1周后视网膜铺片计数RGC。

    • 免疫染色:Brn3a(RGC特异性标记物)+ DAPI核染。

  • 功能检测

    • 视网膜电图(ERG):评估视网膜整体功能(需排除角膜混浊影响)。

    • 模式ERG(PERG):特异性反映RGC功能。

3. 视神j病理分析

  • 轴突计数:视神经横截面透射电镜(TEM)或甲苯胺蓝染色。

  • 胶质细胞活化:GFAP免疫组化(星形胶质细胞增生标志)。


三、模型验证与数据分析

  1. 成功标准

    • 眼压持续升高>25 mmHg(小鼠)或>30 mmHg(大鼠)超过7天。

    • RGC数量减少≥30%(对照眼相比)。

  2. 对照组设计

    • 假手术组(仅做角膜穿刺无激光/注射)。

    • 对侧未处理眼(自身对照)。


四、常见问题与解决方案

问题可能原因解决方案
眼压升高不稳定微球阻塞不w全/激光能量不足增加微球浓度或激光功率,重复操作
角膜混浊影响检测激光/注射损伤角膜使用透明角膜膏(如羟丙基甲基纤维素)保护
RGC标记失败逆行标记时间不足延长荧光金扩散时间至7-10天


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