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脑脊髓炎动物模型构建

简要描述:脑脊髓炎动物模型构建:构建脑脊髓炎(Encephalomyelitis)动物模型是研究多发性硬化(MS)、感染性脑炎或自身免疫性中枢神经系统疾病的重要工具

  • 更新时间:2025-07-11 09:14:48
  • 访  问  量:1

详细介绍

脑脊髓炎动物模型构建

一、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型

(模拟多发性硬化/MS)

1. 经典诱导方法

模型类型适用动物抗原与佐剂疾病进程
主动免疫EAEC57BL/6小鼠MOG₃₅-₅₅肽(100-200 μg)
- 完q弗氏佐剂(CFA)+ 百日咳毒素(PTx,200 ng)
慢性进展性,12-14天发病

SJL/J小鼠PLP₁₃₉-₁₅₁肽(50-100 μg)
- CFA + PTx
复发-缓解型,7-10天发病
过继转移EAEB6/SJL小鼠- 体外用MOG激活T细胞,静脉回输(5×10⁶个细胞)快速发病(3-5天),避免佐剂干扰

2. 关键步骤

  • 免疫方案

    • 皮下注射抗原乳化液(脊柱两侧4点,共100 μL)。

    • PTx腹腔注射(0天及2天,各200 ng)。

  • 疾病评分(0-5分标准):

0: 无症状  

1: 尾部无力  

2: 后肢轻瘫  

3: 后肢完q瘫痪  

4: 四肢瘫痪  

5: 濒死状态

3. 注意事项

  • 品系差异:C57BL/6小鼠需PTx增强血脑屏障穿透,SJL/J小鼠易复发。

  • 病理验证:脊髓切片LFB染色(脱髓鞘)、CD4+ T细胞浸润(免疫组化)。


二、病毒性脑脊髓炎模型

(如西尼罗河病毒、单纯疱疹病毒等)

1. 西尼罗河病毒(WNV)模型

  • 动物:C57BL/6小鼠(6-8周龄)。

  • 方法

    • 脚垫注射WNV(10³-10⁴ PFU),3-7天后出现神经症状(震颤、瘫痪)。

  • 检测

    • 脑组织病毒载量(qPCR)、神经元死亡(Fluoro-Jade C染色)。

2. 单纯疱疹病毒(HSV-1)脑炎模型

  • 方法

    • 鼻腔接种HSV-1(10⁶ PFU),病毒沿嗅神经入脑。

  • 病理

    • 海马和皮层炎症(Iba1+小胶质细胞活化)、病毒抗原(HSV-gB染色)。


三、细菌/寄生虫性脑脊髓炎模型

1. 结核性脑膜炎(TBM)模型

  • 动物:BALB/c小鼠。

  • 方法

    • 尾静脉注射结核分枝杆菌(H37Rv株,10⁶ CFU),4周后脑干出现肉芽肿。

2. 弓形虫脑炎模型

  • 方法

    • 腹腔注射刚地弓形虫(ME49株,10²-10³速殖子),慢性期(4周后)形成脑包囊。


四、脑脊髓炎动物模型构建选择与验证要点

研究目标推荐模型检测终点
自身免疫脱髓鞘MOG₃₅-₅₅诱导EAE临床评分、脊髓LFB染色
病毒感染致神经损伤WNV颅内接种病毒载量、神经元凋亡
血脑屏障破坏机制过继转移EAE荧光s钠渗透率、ZO-1蛋白表达
慢性神经炎症弓形虫ME49感染脑包囊计数(PAS染色)、IFN-γ水平

五、注意事项

  1. 伦理与生物安全

    • 病毒模型需在BSL-2/3实验室操作(如WNV为BSL-3)。

  2. 对照设计

    • 佐剂对照组(仅CFA+PTx)、空白对照组(PBS注射)。

  3. 动态监测

    • EAE模型需每日评分,病毒模型监测体重和神经症状。



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