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动物种类 | 适用场景 | 优缺点 |
---|---|---|
棉鼠 | 经典模型,支持RSV高效复制,模拟人类病理特征(细支气管炎) | ✅ 高病毒载量 ❌ 需特殊饲养(无病原体环境) |
BALB/c小鼠 | 广泛用于免疫机制研究,对RSV敏感(需幼鼠或免疫抑制处理) | ✅ 成本低、工具鼠品系多 ❌ 病毒复制有限(需高滴度接种) |
恒河猴 | 接近人类感染,用于疫苗临床前评价 | ✅ 生理相似性高 ❌ 伦理和成本限制 |
雪貂 | 研究RSV与流感共感染或气道生理变化 | ✅ 呼吸生理接近人类 ❌ 病毒适应性需验证 |
毒株选择:
实验室株(如RSV A2、Long株)或临床分离株(如RSV B/ON1)。
病毒扩增:HEp-2细胞培养,滴度≥1×10⁶ PFU/mL(空斑试验验证)。
接种途径:
麻醉动物(异f烷),垂直滴鼻(50 μL,含1×10⁵–10⁶ PFU病毒)。
幼鼠模型(<7日龄):无需麻醉,直接滴鼻(3–5 μL)。
鼻内接种(最c用):
气管内接种(精准下呼吸道感染):需手术暴露气管,注射病毒液(适用于棉鼠或猴)。
病毒载量检测:
采集肺组织(感染后3–5天峰值期),匀浆后qPCR检测RSV N基因或噬斑试验。
病理评估:
肺组织H&E染色:细支气管周围炎症、上皮细胞坏死评分(0–4分)。
免疫组化:RSV F蛋白染色定位病毒分布。
免疫应答分析:
肺泡灌洗液(BALF):细胞计数(中性粒细胞/淋巴细胞)、ELISA检测IL-6、IFN-γ等。
脾脏/淋巴结:流式细胞术分析T细胞亚群(CD4+/CD8+)。
免疫抑制预处理:
环磷x胺(100 mg/kg,腹腔注射)或抗IFNAR1抗体(阻断I型干扰素应答)。
幼鼠优先:<7日龄小鼠因免疫系统未成熟,病毒复制更显著。
高滴度病毒(≥10⁷ PFU/只)或免疫缺陷鼠(如STAT1⁻/⁻)。
继发细菌感染:RSV感染后接种肺炎链球菌(模拟临床并发症)。
攻毒实验设计:
免疫后4周接种RSV,比较肺病毒载量(疫苗组 vs 佐剂对照组)。
注意:甲醛灭活RSV疫苗可能引发Th2型免疫偏移(嗜酸性粒细胞浸润)。
生物安全:RSV操作需在BSL-2实验室进行,动物饲养需独立通风笼具(IVC)。
对照设置:
阴性对照(PBS接种)、灭活病毒对照(评估非特异性炎症)。
动态监测:
体重下降(>20%需安l死)、呼吸频率(全身体积描记法)。
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