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呼吸合胞病毒动物模型构建

简要描述:呼吸合胞病毒动物模型构建:呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)是导致婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体,构建合适的动物模型对研究其致病机制、免疫应答及药物/疫苗评价至关重要

  • 更新时间:2025-07-11 09:19:09
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详细介绍

一、呼吸合胞病毒动物模型构建选择依据

动物种类适用场景优缺点
棉鼠经典模型,支持RSV高效复制,模拟人类病理特征(细支气管炎)✅ 高病毒载量
❌ 需特殊饲养(无病原体环境)
BALB/c小鼠广泛用于免疫机制研究,对RSV敏感(需幼鼠或免疫抑制处理)✅ 成本低、工具鼠品系多
❌ 病毒复制有限(需高滴度接种)
恒河猴接近人类感染,用于疫苗临床前评价✅ 生理相似性高
❌ 伦理和成本限制
雪貂研究RSV与流感共感染或气道生理变化✅ 呼吸生理接近人类
❌ 病毒适应性需验证

二、呼吸合胞病毒动物模型构建核心步骤

1. 病毒准备
  • 毒株选择

    • 实验室株(如RSV A2、Long株)或临床分离株(如RSV B/ON1)。

    • 病毒扩增:HEp-2细胞培养,滴度≥1×10⁶ PFU/mL(空斑试验验证)。

2. 动物感染
  • 接种途径

    • 麻醉动物(异f烷),垂直滴鼻(50 μL,含1×10⁵–10⁶ PFU病毒)。

    • 幼鼠模型(<7日龄):无需麻醉,直接滴鼻(3–5 μL)。

    • 鼻内接种(最c用):

    • 气管内接种(精准下呼吸道感染):需手术暴露气管,注射病毒液(适用于棉鼠或猴)。

3. 感染后监测
  • 病毒载量检测

    • 采集肺组织(感染后3–5天峰值期),匀浆后qPCR检测RSV N基因或噬斑试验。

  • 病理评估

    • 肺组织H&E染色:细支气管周围炎症、上皮细胞坏死评分(0–4分)。

    • 免疫组化:RSV F蛋白染色定位病毒分布。

  • 免疫应答分析

    • 肺泡灌洗液(BALF):细胞计数(中性粒细胞/淋巴细胞)、ELISA检测IL-6、IFN-γ等。

    • 脾脏/淋巴结:流式细胞术分析T细胞亚群(CD4+/CD8+)。


三、模型优化策略

1. 增强病毒复制(小鼠模型)
  • 免疫抑制预处理

    • 环磷x胺(100 mg/kg,腹腔注射)或抗IFNAR1抗体(阻断I型干扰素应答)。

  • 幼鼠优先:<7日龄小鼠因免疫系统未成熟,病毒复制更显著。

2. 模拟重症感染
  • 高滴度病毒(≥10⁷ PFU/只)或免疫缺陷鼠(如STAT1⁻/⁻)。

  • 继发细菌感染:RSV感染后接种肺炎链球菌(模拟临床并发症)。

3. 疫苗评价模型
  • 攻毒实验设计

    • 免疫后4周接种RSV,比较肺病毒载量(疫苗组 vs 佐剂对照组)。

    • 注意:甲醛灭活RSV疫苗可能引发Th2型免疫偏移(嗜酸性粒细胞浸润)。


四、注意事项

  1. 生物安全:RSV操作需在BSL-2实验室进行,动物饲养需独立通风笼具(IVC)。

  2. 对照设置

    • 阴性对照(PBS接种)、灭活病毒对照(评估非特异性炎症)。

  3. 动态监测

    • 体重下降(>20%需安l死)、呼吸频率(全身体积描记法)。

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