囊胚注射实验

简要描述：囊胚注射实验是一种将外源细胞（如胚胎干细胞或基因编辑后的细胞）注入早期胚胎（囊胚期）的技术，用于制备嵌合体或转基因动物模型。注射的细胞可参与胚胎发育，形成嵌合体个体，其中部分组织或器官由外源细胞构成。该技术广泛应用于基因功能研究、疾病模型建立及再生医学领域，是研究细胞分化、发育生物学和基因编辑的重要工具。

更新时间：2025-07-25 13:55:53
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一、技术定义与核心原理

囊胚注射是将基因修饰后的胚胎干细胞（ES细胞）注入囊胚期胚胎（发育约3.5天的小鼠胚胎），通过嵌合体培育获得基因修饰动物模型的技术。其核心机制包括：

嵌合体形成：外源ES细胞与宿主囊胚内细胞团（ICM）融合，共同发育为嵌合体后代。
生殖系传递：ES细胞分化为生殖细胞，实现基因修饰的遗传（需嵌合率＞60%）。
时空窗口：囊胚期胚胎细胞分化程度低，且囊腔结构便于显微操作。

生物学基础：
囊胚由外层滋养层细胞（发育为胎盘）和内细胞团（发育为胎儿）构成，注射靶向ICM区域确保ES细胞参与胚胎发育。

二、标准化操作流程

（一）前期准备

步骤	关键操作与参数
ES细胞制备	需多能性验证（如Oct4表达），常用129品系或C57BL/6遗传背景ES细胞
囊胚供体鼠处理	超排卵：PMSG（5IU）→ hCG（5IU）→ 与雄鼠合笼 → 取见栓后2.5天的囊胚（8细胞期胚胎培养过夜获得）
显微注射系统校准	注射针内径10-15μm，单次注入10-15个ES细胞

（二）注射与胚胎移植

存活率控制：注射后囊胚存活率需＞90%，移植胚胎数≥10枚/受体鼠。
嵌合体鉴定：

毛色嵌合：ES细胞（如129-agouti）与宿主囊胚（如C57BL/6黑色）毛色差异直观判断嵌合率。
基因型验证：PCR检测外源基因或荧光标记（如GFP）。

（三）遗传系建立

高嵌合体筛选：选择毛色嵌合＞70%的雄性嵌合鼠。
生殖系传递：嵌合鼠与野生型交配 → F1代基因型检测 → 建立纯合品系。

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