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常用动物
小鼠(BALB/c、C57BL/6):常用,成本低,易操作,但需适应病毒(如H1N1需小鼠适应株)。
雪貂:对流感病毒高度敏感,可模拟人类症状(发热、喷嚏等),但成本高、饲养复杂。
豚鼠:适用于病毒传播研究。
非人灵长类动物(如猕猴):接近人类免疫反应,但伦理和成本限制高。
选择依据
研究目的(致病性、传播性、免疫应答等);
病毒宿主适应性(如禽liu感病毒常需雪貂)。
病毒来源
临床分离株(需适应动物宿主,如小鼠连续传代);
实验室标准株(如A/Puerto Rico/8/1934 H1N1)。
病毒扩增与滴定
通过MDCK细胞或鸡胚扩增病毒;
测定TCID₅₀或PFU(空斑形成单位)以确定感染剂量。
感染途径
鼻腔接种(常用):模拟自然感染,轻麻醉后滴注病毒液(小鼠50μL,雪貂500μL);
气管内接种:需手术暴露气管,用于深部感染研究;
气溶胶暴露:模拟空气传播,需专用设备。
感染剂量
预实验确定LD₅₀或MLD₅₀(半数致死量);
典型剂量:小鼠10³–10⁶ PFU,雪貂10⁶–10⁷ PFU。
临床症状
体重下降(>15%需安乐s);
活动减少、竖毛、呼吸急促等。
病毒学指标
肺组织病毒载量(qPCR或噬斑试验);
鼻洗液/气管分泌物病毒滴度。
病理学分析
肺组织HE染色(炎症、出血、肺泡损伤);
免疫组化检测病毒抗原分布。
免疫应答
血清抗体(ELISA检测IgG/IgM);
细胞免疫(流式检测T细胞亚群)。
生物安全
流感病毒需在BSL-2及以上实验室操作;
禽liu感高致病株(如H5N1)需BSL-3。
动物福利
遵循“3R原则”(减少、替代、优化);
设置人道终点(如体重下降>20%需终止)。
对照设置
阴性对照(PBS或未感染组);
阳性对照(已知毒力株)。
低致病性病毒不发病:可提高剂量或使用免疫缺陷小鼠(如STAT1⁻/⁻);
动物个体差异:增加样本量(每组至少5-8只);
传播模型构建:需共饲养感染与未感染动物,监测接触传播。
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